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間充質干細胞(MSC)如何培養與鑒定?
更新時間:2020-10-30 點擊次數:2466
相比于胚胎干細胞或神經干細胞,MSC具有易獲取、易體外培養、傳代穩定性、低免疫原性等優勢,在體外經過多次傳代后仍具有多向分化和自我復制的潛能,且MSCs多來自于成年的組織,研究過程的道德和倫理學問題較小。
MSC的大小與形狀具有異質性,即不同種屬或不同組織的MSC具有不同的生長形態,例如三極形、長梭形、小圓形、短梭形和扁平形態。幾乎所有的MSC都是貼壁生長,具有較強的貼壁能力,而MSC的原代分離也正是利用了MSC強貼壁的特性。例如,骨髓MSC的分離方法為:將從組織中分離出來的單個核細胞懸浮培養于含有FBS的培養基中,1~2天后去除非貼壁細胞,保留貼壁細胞再培養2-3周即可獲得。此外也可采用免疫磁珠對MSC進行分選,但這種方法成本較高。
對于MSC的鑒定,常采用的方式包括形態學鑒定,表面標志物鑒定和多系分化潛能鑒定。MSC一般呈纖維細胞樣生長,細胞在支持物表面呈梭形或不規則三角形生長,細胞中央有卵圓形核,胞質向外伸出2-3厘米長短不同的突起。MSC的細胞表面標志物則常采用流式細胞儀進行鑒定,不同組織來源的MSCs可共享相同的細胞表面標記,如CD29和CD44。但目前我們對MSC表面分子標志物的研究還不完善,已發現的表面標志物也存在特異性不強的問題,為了讓我們更好地分離、培養和鑒定MSC,需進一步不斷發現新的特異性標志物。
常見的方法
茜素紅染色(成骨誘導)
茜素紅S(AlizarinRedS)鈣染色法是一種旨在通過鰲和技術,使鈣離子和茜素紅S產生復合物,來分析固定處理的細胞樣本中橘紅色鈣沉積現象的經典的技術方法。主要適用于動物原生代或培養細胞的鈣沉積和鈣化結節檢測。廣泛用于骨細胞或組織病理生理的研究。操作簡捷,性能穩定,顯色清晰。
Oil Red O(油紅O)染色(成脂誘導)
作為脂肪細胞的染色劑的原理是使用Oil Red O 的油溶性,對其它的細胞結構著色性差。成脂肪誘導的過程中,細胞在胞漿中不斷有油滴的累積,并不斷的增加變大,后整個細胞的胞漿中都是油滴。Oil Red O染色的方法是對油滴的染色的一種方法。
成軟骨誘導(試劑盒)
好 物 推 薦
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Lifeline | LL-0050 | 成脂培養基套裝 |
Lifeline | LL-0051 | 阿爾辛藍色染色試劑盒 |
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StemCell | 05465 | MesenCult™成骨分化套件(人類) |
StemCell | 05412 | MesenCult™成脂分化試劑盒(人類) |
StemCell | 05455 | MesenCult™-ACF軟骨分化試劑盒 |
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Corning | 88-600-CV | MSC xeno-free SFM |
Lifeline | LL-0062 | 骨髓MSC*培養基套裝 |
Lifeline | LL-0034 | 人間充質干細胞培養基套裝 |
Lifeline | LL-0073 | NSC+纖連 蛋白 細胞培養基套裝 |
Lifeline | LL-0070 | NSC 培養基套裝 |
Lifeline | LL-0062 | 骨髓MSC*培養基套裝 |
Lifeline | LL-0034 | 人間充質干細胞培養基套裝 |
StemCell | 05445 | StemCell MesenCultTM 人間充質干細胞培養基,成分確定、無異源 |
StemCell | 05448 | StemCell MesenCultTM 人間充質干細胞培養基,成分確定、無異源 |
BI | 05-200-1A | MSC無血清培養基 |
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