血細胞計數(shù)板的實驗原理及注意事項
更新時間:2022-02-15 點擊次數(shù):7033
實驗原理
在細胞培養(yǎng)工作中,常需要了解細胞生活狀態(tài)和鑒別細胞是否存活,確定細胞接種濃度和數(shù)量以及了解細胞活力和增殖狀況,如胰酶消化制備的細胞懸液中細胞存活率確定,凍存細胞復蘇后的活力檢測等。
存活測試的原理為染料排除實驗,利用染料會滲入死細胞中而呈色,因活細胞細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用臺盼藍染料,如果細胞不易吸收臺盼藍,則用赤蘚紅B。計算細胞活率:活細胞數(shù)/(活細胞數(shù)+死細胞數(shù))×100%。計數(shù)應在臺盼藍染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,隨時間延長,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼藍與蛋白質(zhì)有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數(shù)更為準確。
注意事項
滴細胞懸液時要干凈利落,加量要適當,過多易使蓋片漂移,或淹過蓋片也會失敗,應重做;過少易出現(xiàn)氣泡;不理想時,應重做。
鏡下計數(shù)時,若方格中細胞分布明顯不均勻,說明細胞懸液混合不均勻,需重新將細胞懸液進行混合,再重新計數(shù)。
計數(shù)時,對于位于邊線或交界處的細胞/細胞團,遵循“計上不計下,計左不計右”的規(guī)則。
一個細胞團計做一個細胞。
計數(shù)板計數(shù)時,最適濃度為5~10×105細胞/ml,此范圍外計數(shù)誤差偏大。高濃度細胞懸液,可取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計數(shù)。如果細胞數(shù)目很少則要進行離心再懸浮于少量培養(yǎng)液中。