對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)而言,血清的重要性顯而易見(jiàn)。它含有包括生長(zhǎng)因子在內(nèi)的蛋白、氨基酸、脂類(lèi)、碳水化合物、維生素及其他組分,可以促進(jìn)貼壁或懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持。胎牛血清(FBS)是細(xì)胞培養(yǎng)常用的血清。
什么是胎牛血清?
胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后,發(fā)育未*的胎牛心臟穿刺采血獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子,一旦胚胎發(fā)育*這些因子自動(dòng)消失。
何為內(nèi)毒素?它的作用是什么?
內(nèi)毒素(Endotoxin)是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁外壁層上的*成分。細(xì)菌在生存狀態(tài)時(shí)釋放不出來(lái),只有當(dāng)細(xì)菌死亡自溶或粘附在其它細(xì)胞時(shí),才表現(xiàn)其毒性。內(nèi)毒素的主要化學(xué)成分是脂多糖中的類(lèi)脂A成分。內(nèi)毒素直接參與細(xì)胞凋亡,血清中內(nèi)毒素含量越低,對(duì)細(xì)胞毒性越小,越利于細(xì)胞的生長(zhǎng)和傳代;內(nèi)毒素含量過(guò)高,會(huì)直接導(dǎo)致細(xì)胞提前老化。因此,血清應(yīng)進(jìn)行內(nèi)毒素水平檢測(cè)。國(guó)際上規(guī)定,胎牛血清的級(jí)別應(yīng)以內(nèi)毒素水平的高低來(lái)確定,其中,特級(jí)胎牛血清的內(nèi)毒素應(yīng)<10EU/ml。
胎牛血清的成分有下面幾大類(lèi):
1.蛋白質(zhì)類(lèi)
包括白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白(抑制胰蛋白酶的作用)、胎球蛋白(促進(jìn)細(xì)胞附著)、轉(zhuǎn)鐵蛋白(能結(jié)合鐵離子,減少其毒性和被細(xì)胞利用)、纖維粘連素(促進(jìn)細(xì)胞附著生長(zhǎng))等;
2多肽類(lèi)
主要是一些促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和分裂的生長(zhǎng)因子,最主要的生長(zhǎng)因子是血小板生長(zhǎng)因子,還有成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)因子等,雖然在血清中含量很少,但對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和分裂也起著重要作用;
3.激素類(lèi)
激素對(duì)細(xì)胞的作用是多方面的。包括:胰島素:促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖和氨基酸,與促細(xì)胞分裂有關(guān);類(lèi)胰島素生長(zhǎng)因子:能與細(xì)胞表達(dá)的胰島素受體結(jié)合,從而有胰島素同樣的作用:促生長(zhǎng)激素:促進(jìn)細(xì)胞增殖的效應(yīng);氫化可的松:血清中含有微量該成分,它可能具有促細(xì)胞貼附和增殖作用。但有人證明,血清中的氫化可的松,在細(xì)胞密度較高時(shí)可能有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生分化的作用。
4.其他成分
如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培養(yǎng)基中這些成分的作用并不明顯,與蛋白相結(jié)合的微量元素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)起促進(jìn)作用。