我們建議在臨床ELISA試劑盒測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應時間的條件。將微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內溫度從室溫升至37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，ELISA試劑盒很少有人注意這個問題，通常是將微孔板一放入溫箱即開始計時，這樣就很容易造成實際測定中溫育時間不夠，弱陽性樣本測不出來的問題。
曾有一地處南方的血站同行提出了一個問題，就是在每一年的冬季總有那么一個多月的時間，ELISA試劑盒在做HBsAg測定的室內質控中，ELISA試劑盒測定由衛生部臨床檢驗中心供應的1ng/ml弱陽性樣本時，總是測不出來，不知原因為何?這可能就與南方冬天室內溫度較低有關，此時微孔板轉入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性。
因此，為保證37℃下足夠的溫育時間，臨床實驗室可自行確定本實驗室不同季節(不同室溫下)微孔板從室溫拿至溫箱后需要多長時間孔內溫度才能達到37℃，從而適當延長板條在溫箱中的放置時間。用一小溫度計放置板孔反應溶液中測量觀察即可。ELISA試劑盒作為一種固相免疫測定，抗原抗體的結合反應在固相上進行，要使液相中的抗原或抗體與固相上的特異抗體或抗原*結合，必須在一定的溫度條件下反應一定的時間。
