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紅細胞裂解液使用方法

更新時間:2014-05-06 點擊次數(shù):6179

使用說明:
對于組織細胞樣品:
1. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。
2. 加入3-5倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入3-5ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。
對于組織細胞樣品無需洗滌的快速操作步驟:
1. 新鮮組織經(jīng)過膠原酶或胰酶等消化處理,通過適當方法分散成細胞懸液,離心棄上清。
2. 對于0.2ml細胞沉淀加入1ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。
3. 加入15-20ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,混勻。
4. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
5. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
6. 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。
   說明:對于常規(guī)步驟,多一步洗滌過程中的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更好
   一些,同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時需要大體積的離心管。
對于血液樣品:
1. 取新鮮抗凝血,400-500g離心5分鐘,離心棄上清。
2. 加入6-10倍細胞體積的紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解1-2分鐘。例如細胞沉淀的體積為1ml,則加入6-10ml的紅細胞裂解液。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解1-2分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至4-5分鐘,并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。
3. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 洗滌1-2次:加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,重懸沉淀,400-500g離心2-3分鐘,棄上清。可再重復1次,共洗滌1-2次。洗滌液的用量通常應至少為細胞沉淀體積的5倍。4℃離心效果更佳。
6. 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。
   注意:對于微量或少量的血液樣品,可以在*步中不進行離心棄上清的操作,直接在第二步中加
   入10倍血液體積的紅細胞裂解液,并在室溫或4℃裂解4-5分鐘。對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。后續(xù)步驟相同。
對于血液樣品無需洗滌的快速操作步驟:
1. 每1ml新鮮抗凝血中加入10ml紅細胞裂解液,輕輕吹打混勻,裂解4-5分鐘。本步驟在室溫或4度操作均可。注意:對于鼠的血液,裂解4-5分鐘已經(jīng)足夠,對于人的外周血,宜延長裂解時間至10分鐘,但通常不宜超過15分鐘,并且裂解過程中宜適當偶爾搖動以促進紅細胞裂解。
2. 加入20-30ml PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液,混勻。
3. 400-500g離心5分鐘,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。
4. 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不*,可以重復上述步驟2和步驟3一次。通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的一些檢測。
5. 根據(jù)實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀后即可進行計數(shù)等后續(xù)實驗。


說明:對于常規(guī)步驟,多一步洗滌過程的離心,但可以節(jié)省洗滌液的用量,并且洗滌效果也更一些,同時不需要大體積的離心管。快速步驟少了一次離心,但洗滌效果略差一些,同時需要大體積的
 

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